膠原酶I的化學本質及使用

　　膠原酶的化學名為膠原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結構，而不損傷其它蛋白質和組織。

　　膠原酶I的化學本質是一種蛋白酶，它能夠特異性的結合 Pro-X-Glyc-Pro序列中，中性氨基酸(X)和甘氨酸之間的肽鍵。該序列高頻率的存在于膠原中。膠原酶是*的一種可以降解廣泛存在于結締組織中的具有三股螺旋的天然膠原纖維的蛋白酶。但同時，這對溫度、PH和導致蛋白質變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構象和性質。

　　膠原酶I僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。

　　膠原酶I的使用

　　1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小塊

　　2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶I溶液，旋緊蓋子(密封燒瓶)。

　　3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內，每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時間與組織的類別很有關系，對于某些腫瘤組織或其他較致密結締組織，消化時間4~48h，對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經搖動即成細胞團或單個細胞，可以認為已消化充分。上皮組織經膠原酶消化后，由于上皮細胞對此酶有耐受性，可能仍有一些細胞團未*分散，但成團的上皮細胞比分散的單個上皮細胞更易生長，因此，如無特殊需要可以不必再進一步處理。

　　4.收集消化液(有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網過濾)，離心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者無血清培養液離心漂洗1~2次，去除上清，加培養液制成細胞懸液，接種培養瓶。

　　因為膠原酶I分子顆粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養液配制。